Uma sugestão do Francesco

Francesco é um fofo. :D Pena que ele não sabe português para ler estas palavras. rs

O Mauro contou a ele sobre nossos problemas com o VN. Voltando do almoço (ele indo), ele me falou a opinião do Francesco, que talvez o motivo seja que a membrana do lisossomo esteja tão, mas tão danificada, que não consegue reter o corante. Tá, mas então a cél (seu citoplasma)deveria estar corada, certo? Segundo o Fran, o corante não ficaria no citoplasma porque seu conteúdo não é ácido, e o corante tem afinidade por meio ácidos, logo ele sai da cél. Então, aquilo que eu via no ctrl, as céls com "bolotinhas" vermelhas (os lisossomos com VN), significa justamente o contrário do que achava, ou seja, aquilo sim que é a cél boa, pois ela consegue reter o corante... tadinha, e eu colocava ela no grupo das coradas...tanto que, com o passar do tempo, esses lisossomos crescem (veja o filmezinho que fiz, como os lisossomos tão grandes!), e vai aumentando a chance de se romperem. Agora sim, tudo faz sentido. Eu lia nos artigos dizendo q o tempo de retenção pra céls saudáveis é de 180 min em média. (Tempo de retenção é o tempo que leva para que 50% das céls estejam coradas. Por ex, no tempo 1, do total de céls contadas apenas 10% estavam coradas; em t2, 15%; t3, 25%...t qualquer, 50%. Pronto, aí pára de contar e esse tempo, 30min, 1h,2h...etc, será o tempo de retenção. Claro, tem vezes que cél é tão boa, mas tão boa, que fica lá, mais de 2h, 2h e meia retendo...como também há vida out do lab, estabelece-se um tempo máximo, que mesmo não tenha chegado a 50%, a contagem é finalizada. Simples? Levei bastante tempo pra entender, o Mauro tentou me explicar diversas vezes, e eu com aquela cara de "hein?!"). E minhas céls, do ctrl tinha os tais 50% logo nos primeiros 5min!!!

Então, a estratégia agora é observar mais cuidadosamente os lisossomos, e contar como céls corada somente as com o citoplasma corado. Mas... e o que fazer com aquelas que tem uma leeeve coloração, como se um, unzinho lisossomozinho tivesse rompido?

Outra coisa, isso resolve o ctrl, mas ainda ficamos pendurados com os tratados. O Mauro falou para colocar HEPES (um tampão), que fique a 20 mM no L15. Vamos testar, então.